بهدف إحداث بعض الطفرات الوراثية بإستعمال حامض النيتروز المطفر Nitrous acid باعتباره وسيلة تطفير آمنة وذو فعالية جيدة في إحداث الطفرة الموقعية، يتم إجراء التجربة بتعريض الأبواغ الكونيدية (الأبواغ اللاجنسية لفطر Aspergillus أو (Fusarium لحامض النيتروز لمدة 10,20,30,40,50 دقيقة، فضلاً عن تجربة الكونترول التي تتطابق فيها كل ظروف التجربة باستثناء إستعمال الحامض مع الكونيديا، ويفضل أن يكون الإختبار في مجموعات تتكون كل مجموعة من خمسة طلاب تزود كل مجموعة بالمواد الآتية:

1- 10 مللتر من معلق كونيديا كثافته 10 X 1.5 بوغ / مللتر.

2-6 أنابيب اختبار فارغة معقمة موسومة بالأعداد 6-1

3-12 طبق بترى يحتوي كل منها على وسط غذائي PDA  (Potato  Dextrose Agar) موسومة بالأرقام 6-1 لفرد الأبواغ الكونيدية المعاملة بالحامض النيتروزي بالإضافة للتجربة الحاكمة.

4 - أنبوبتي اختبار يحتوي كل منهما على 9.9 ml لإجراء تخفيف المعاملة فضلاً عن تجربة المقارنة.

5 - أطباق بتري يحتوي كل منها على وسط غذائي PDA موسومة 0S,1S,2S,3S,4S,5S,6S لفرد معلق الكونيديا المخفف بهدف تقدير أعداد الكونيديا الحية بعد المعاملة بالحامض المطفر.

6- لفافة تحتوى على سحاحات مدرجة معقمة مختلفة لنقل الكونيديا.

 تستعمل الطرائق المايكروبيولوجية في كل خطوة لضمان دقة النتائج.

 إن خطوات هذه الطريقة يمكن إيجازها كما يلي:

1 – نقل 0.5 ml  من المعلق إلى كل أنابيب الاختبار 6-1

2 -إضافة 1.0 ml M Acetate buffer لكل أنبوبة.

3- إضافة خمسة قطرات بحجم 0.05 ml من محلول M sodium nitrite  0.5 الى الأنبوب رقم 1 ومن ثم حساب الزمن بدقة من لحظة إضافته.

4- ولإيقاف التفاعل، يضاف 1.5 ml الى الأنبوب رقم 1 من محلول  Na₂HPO₄ 0.1 M بعد مضي 10 دقائق.

5- تكرار الخطوات 3 و 4 الى الأنابيب الأخرى وهي 2 و 3 و 4 و 5 بفارق زمني 10 دقائق للكل على التوالي.

6- تكرار الخطوات 3 و 4 الى الأنبوب رقم 6 باستثناء إضافة ml  0.5 ماء معقم بدلاً من محلول   M sodium nitrite0.1.

7 - نشر 5 قطرات (drops 5) بتركيز 0.05 من كل معاملة على أطباق الوسط الغذائي جميعها بإستعمال الناشرة الزجاجية.

8- حفظ الأطباق في حاضنة بدرجة 27 مئوية لمدة 48 ساعة قبل فحصها للتعرف على الأنواع الطافرة.

ومن أجل الحصول على تقدير للكونيديا الحية في كل معاملة، نجري الخطوات التالية:

1 - تخفيف الكونيديا لكل معاملة بنقل 0.1 ml إلى الأنبوب الذي يحتوي على 9.9ml ماء مقطر معقم من أجل الحصول على التخفيف 1/100 .

 2- المزج بقلب الأنبوب جيداً دون أن يبلل الغطاء القطني، ثم ينقل من هذا التخفيف ما مقداره ml 0.1 إلى الأنبوب الثاني الذي يحتوي على الماء المقطر من أجل الحصول على التخفيف الثاني 1/10000.

 3- قلب محتويات الأنبوب الثاني جيداً، ثم يتم نشر 5 قطرات (drops 5) بتركيز 0.05 ml من هذا التخفيف على طبق الوسط الغذائي المعد لذلك.

4- حفظ الأطباق كما في الخطوة رقم 7 ليتم إحصاء وعد أعداد المستعمرات بعد مضي 48 ساعة والمقارنة بين كل المعاملات.

مواضيع ذات صلة

تحليل تجربة مندل لدراسة القانون الأول

الرموز في الوراثة

أنواع الطفرات Types of mutations

تعريف الطفرة

الخرائط الوراثية Genetic maps

الأساس الخلوي لحدوث العبور

التداخل و التوافق Interference and coincidence

خطوات العبور الوراثي

العبور الوراثي

أنواع الارتباط Linkage types

تعريف الارتباط

تجارب باتيسون و پونت