تتميز هذه الطريقة بالكفاءة والسرعة العالية، ويستخدم في هذه الطريقة عمود قصير يتراوح طوله بين 50-10 سم، وقطره الداخلي من 10-2 مم، والعمود مصنوع من الفولاذ ليتحمل الضغط العالي المار به. ويجب أن تكون جدران العمود الداخلية ملساء حتى لا يحدث أي تغيير في شكل الوسط الثابت بداخل العمود، ولا تتكون جيوب من الوسط المتحرك مما يتسبب في زيادة عرض الطبقات، فتعطي بذلك كروماتوغراما غير متماثل يؤثر مباشرة في كفاءة العمود . وتتم تعبئة العمود بالطور الثابت، وهو عبارة عن حبيبات من الألومينا أو من السيلكا أو من مبادل راتنجي resin. وقد تغطي الحبيبات التي يبلغ قطرها بين 2-50 ميكروميترا بطبقة رقيقة من سائل مناسب يعمل هذا السائل كطور ثابت.

كما يظهر في الشكل (16-1) فإن جهاز HPLC يتكون من مجموعة من الأوعية تحتوي على الوسط المتحرك الذي يمكن أن يكون سائلاً واحدا أو مخلوطاً من السوائل، يتم اختيار نسبة كل من هذه السوائل عن طريق صمام الخلط. ويجب طرد كل من غاز الأكسجين والنتروجين من هذا الخليط قبل أن تبدأ عملية الفصل، إذ إن وجود أي من هذين الغازين سيؤثر في استجابة المقدر، ولن يتم الحصول على خط قاعدي مستقيم، لذا يمرر غاز الهيليوم بداخل الوسط المتحرك لفترة تكفي لطرد أي غازات ذائبة بهذا الوسط وبعد ذلك يتم ضخ الوسط المتحرك تحت ضغط مرتفع بواسطة مضخة إلى داخل الفرن خلال أنبوب حلزوني ليكتسب درجة الحرارة التي تتم عندها عملية الفصل. وفي بعض الأجهزة، يمرر الوسط المتحرك خلال عمود حماية يقوم بسحب أي مواد غريبة، مما يعمل على حماية عمود الفصل من هذه المواد لإطالة عمر هذا العمود وتحقن العينة في الحاقن باستخدام إبرة حقن تستطيع حقن حجم بالمايكروليتر، ثم تمر العينة مع الوسط المتحرك بداخل عمود الفصل. وتحدث عملية الفصل نتيجة لتوزع مكونات العينة بين كل من الوسط الثابت والوسط المتحرك، ونتيجة للضغط العالي المستخدم وتفاوت الأوقات التي يمضيها كل مكون من مكونات العينة سواء في الوسط الثابت أو المتحرك، وباستخدام الظروف المثلى من معدل سريان الوسط المتحرك، ودرجة

حرارة العمود والضغط المستخدم ينفصل كل من مكونات العينة داخل العمود ويصل كل واحد منها إلى المقدر في أوقات مختلفة، ويذلك يظهر المنحنى الكروماتوغرافي على هيئة منحنيات متماثلة منفصلة عن بعضها. وتوجد عدة أنواع من المقدرات المستخدمة مثل مقدر الأشعة الفوق بنفسجية، وهو ذو حساسية للعديد من المركبات العضوية التي تمتص في مجال هذه الأشعة، كما يوجد مقدر يعمل على ظاهرة معامل الانكسار وكذلك المقدرات الكهروكيمائية والمقدر ذو التأين اللهبي. ومن المعروف أن كفاءة المقدرات في جهاز HPLC ليست بكفاءة المقدرات المستخدمة في كروماتغرافيا الغاز.

مواضيع ذات صلة

الشكل الوضعي للسكريات الأحادية configuration of monosaccharides

نظام استخلاص الجزئيات البسيطة

اختيار الطور الجديد وعدد مرات الاستخلاص

ميكانيكية الاستخلاص

طبيعة الصنف المستخلص

الاستخلاص بالمذيب

امتصاص الشعاع الكهرومغناطيسي وطيف الامتصاص

الطرق الكيميائية الطيفية في التحليل.

طبيعة الكيمياء التحليلية

التحليل بالحقن الجرياني المتقطع Batch flow injection analysis

الحقن الجرياني متعدد التخفيف Multi-commutation in FIA

التحليل بالحقن المتعاقب Sequential Injection Analysis